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药学是连接健康科学和化学科学的医疗保健行业，它承担着确保药品的安全和有效使用的职责。药学主要研究药物的来源、炮制、性状、作用、分析、鉴定、调配、生产、保管和寻找（包括合成）新药等。主要任务是不断提供更有效的药物和提高药物质量，保证用药安全，使病患得以以伤害最小，效益最大的方式治疗或治愈疾病。
文献（拼音wén xiàn），汉语词语，意思为有历史意义或研究价值的图书、期刊、典章。出自《论语·八佾》。浅谈药学研究生培养过程中实验室学术例会(Lab Meeting)的设置与实施_药学论文假若你对这篇文章想说点什么，请告诉我们！
浅谈药学研究生培养过程中实验室学术例会(lab meeting)的设置与实施
进入21世纪以来，药学这一具有持久生命力的学科已经成为衡量各国经济与科技实力的重要标志之一。药学的发展和创新直接关系着人类的健康与生存。我国的医药产业在近年来高速发展，但仍然面临巨大的挑战。据近年来的统计显示，在国家食品药品监督管理局每年受理的上万个药品注册申请中，新药申请只占10%，而简单改剂型和仿制药申请占近90％。要在根本上改变这一现状，提高我国药学研究的创新性，就必须重视药学专业人才的教育和
培养。而药学研究生的培养承担了为我国药学发展输送专门性人才的重要任务。
实验室学术例会（lab meeting）已经逐渐成为国际国内各知名高校实验室科研教学的关键环节和重要模式，药学因其具有发展迅速，要求严谨，多学科交叉，应用性强等特点，更加地需要针对研究生开展和实施lab meeting。本文就第三军医大学药学院组织开展lab meeting的实践与同行进行探讨。
一、lab meeting的组织形式
1.文献沙龙（journal club） 上文库
对于迅猛发展的药学来说，journal club不失为一种高效率的新观点交流和新领域探索方法。通常为固定的人群就反映某一主题的最新研究进展进行学习和讨论。实验室每个人都可以就本文献研究的多个问题进行讨论，例如：实验设计、统计方法、实验对照等。一次journal club应该尽可能地对该主题的所有最新进展进行汇报和交流，特别是对同一问题的不同研究结果甚至矛盾的研究结果进行。WWW.0519news.COm即使所有研究都呈现出相同的结果，也可以对该研究的不同角度和未来可能的方向进行讨论。通过对最新研究成果的了解、学习、积累、质疑和发散，拓宽研究生的知识面，加强研究生的科研思维，训练研究生的创新能力，以达到在阅读中获得知识，掌握方法，开辟新的研究方向的目的，最终实现研究生自身能力和学科发展的同步推进。
2.课题讨论
研究生通常都参与实验室的在研课题，实验室应当安排适当的时间让研究生对在研课题的结果进行汇报并进行结果的讨论。研究生可能在实验技术和结果方面缺乏经验，不能针对实验现象进行合理准确的。通过整个实验室或者实验团队集体智慧的，可以避免研究生得出错误的结论并在实验设计上与实验目的背道而驰。
此外，药学研究需要的严谨性是毋庸置疑的。新药研究作为一个“高技术”“高投入”“高风险”“高回报”的课题，在实验室教授的带领下由团队完成，其中的有生力量就是在读的研究生。及时有效地准确把握研究生的研究进展，培养研究生的严谨科研作风，保证实验结果的真实可信，必须及时地进行课题讨论。
3.专题讲座
多学科的交叉在药学研究中尤为重要。医学、生物学、化学等都是药学研究的重要基础，而植物学、材料科学以及信息学等学科与药学的碰撞可能会产生更大的火花。在lab meeting的组织中，我院各实验室多次邀请国内外教授来校交流。同时，新药研究需要对药物申请、药物质控以及临床前研究的政策要求非常熟悉，我院也专门邀请相关的工作人员来实验室开展专题讲座。
二、实践中的几点体会
1.人数要适当，范围要控制
lab meeting要发挥最大作用，就必须使每个人都参与
转贴于上文库 www.ybask.com讨论，并有发言的机会。人数过多，会造成部分研究生存在搭便车的心理，不会进行主动的思考而只是充当“接收器”。人数过少，则影响讨论的氛围，每个研究者尤其是研究生本身的学术积淀有限，往往只能从有限的角度去看待问题，不能对一个问题进行全面的、深入的讨论。2.汇报者应充分准备
在开展journal club的时候，汇报者对文献充分的准备会引发大家的积极性和创造性，而草草准备又缺乏目的性的发言和回答，会使参会者失去继续提问和讨论的兴趣和动力。其中，对文献的选择要坚持几个原则，即目的性、前沿性上文库、完整性。即文献必须是围绕一个话题选取，是目前该研究领域的最新进展和热门话题，且尽可能地收集完整。对于汇报者来说，必须对该研究主题的研究历史和背景深入了解，对研究方法非常熟悉，对实验结果可以进行辩证的。
3.调动积极性，不搞一言堂
发挥作用的一个重要前提就是研究生的积极参与，而不是仅仅聆听。研究生对文章的阅读也应该是批判性的，而不是全盘接受。对于课题开展过程中出现的各种情况，研究生首先应该根据查阅文献或者请教老师而有自己的和判断。如果仅仅是由导师根据自己的理解进行指示，不利于发挥lab meeting对研究生
锻炼能力和提升思维的作用。
综上所述，lab meeting在药学研究生的培养过程中起着非常重要的作用，为保证质量，必须对实验室学术例会的设置与实施环节进行有效的调控。 转贴于上文库 www.ybask.com
药学心理学在药学保健中的应用
1 一般资料与方法
随着人们生活水平的提高，医学事业的不断发展，人们对医学保健的期望值也越来越高，药学心理学在医学保健中的应用，便是顺应医疗体制改革的需要，是满足人们对医学服务质量提高期望的一种体现。
1.1 一般资料：统计我院自20xx年4月-20xx年4月收治的162例通过药学心理学进行药学保健的患者资料，其中男性98例，女性64例，总体年龄16岁-58岁不等，体重在40-70kg之间，从文化水平来看，大学毕业生共有62例，高中及初中毕业生共57例，小学毕业的有26例，文盲17例。经过我院进行的心理学药效治疗，患者已经基本痊愈，心情指数以及生活质量得到明显的提升。
1.2 方法：通过不同的患者情况我们可以看出药学心理学在医学保健中的不同应用情况。
1.2.1 概念：药学心理学的概念出现的较晚，1979年才有专家将相关知识应用到卫生服务体系的配药过程中去。随着医疗事业的不断发展进步，药学心理学逐渐演变为一门的学科，成为医学保健中的重要服务项目。
药学心理学是将药学与心理学进行完美结合的一门学科，是借助外在力量的达到与药效相同效果的一种医学保健手段，这种手段被应用于医学保健事业中，抵消了人们对药物的抗拒心态，从患者的心理上调动起抵抗疾病的顽强情绪，从而在不需要强效药物的情况下对患者进行医治，这种治疗不会产生药物的副作用，取得了最好的药物治疗成果。
我院对不同情况的患者分别进行观察治疗，发现药学心理学中心理学对感染性疾病患者的医治有很好的疗效，而药学心理学中的药学有利于医治得冠心病、糖尿病、神经衰弱等患者。www.0519news.CoM药学心理学同时还可以对重症精神疾病患者进行康复治疗，有利于解除其心理负担压力。
1.2.2 应用：药学心理学分为心理药学以及心理药效学两大分支，因此在应用时应该略加注意。
1.2.2.1 心理药学在药学保健中的应用：心理药学一般应用于精神疾病患者的治疗，我院收治的162例病例中有26例属于这种情况，因此不仅需要药物的控制，还需要通过精通心理药学知识的临床药师对其进行精神方面的舒缓与开导，帮助其缓解精神压力，助其恢复。
在进行这方面患者治疗的同时，我院根据患者的家庭背景、文化程度以及患者的临床数据制定了合理的治疗方案。通过药理医师参考精神病学、药学以及医学的相关文献对患者进行心理上的疏导、药物控制，积极运用最有效的治疗方法。
主治医师通过与患者家属的交流沟通，对患者病情进行进一步的了解，并且向患者家属以及患者提供最新的咨询、教育资料，提高心理药学对患者的治疗质量。
1.2.2.2 心理药效学在医学保健中的应用：心理药效学是一种进行临床试验的新概念，是将心理学、药理学以及医学的理念结合在一起的一门新型学科。在治疗过程中，主治医师对患者的心理把握是关键，如果主治医师能够通过心理因素使同一种药物出现不同的药效，那么对于患者的治疗便能够达到事半功倍的效果。
对于心理疾病的治疗，不管国内还是国外都有显著的例子，以前并没有药学心理学这门学科，人们对心理疾病的治疗方法过度压抑，约翰?纳什便是一个很好的例证。如今随着科技的发展，传统的治疗方法已经得到了很大的改进，运用心理学的知识对不同疾病的患者进行治疗，对患者的病情好转有很大的帮助。
从我院临床试验来看，运用心理药效学的患者分为两类，一类是主动求医型的，一类是被动求医型的。主动求医型的患者主要应用心理药效学进行治疗，这些病患相对而言比较好诊治，他们的心理负担虽重但是病情并不是十分的严重。对于被动求医型的患者，由于神经系统受到一定程度的损坏，医疗程度要难一些，因此对于这一部分的患者，心理药效学往往应用于其恢复期。
1.2.3 方法：针对不同的患者，应用运用不同的方法进行治疗，药学心理学的应用范围广泛，在消化内科、神经内科、心内科以及肿瘤科皆有应用。
1.2.3.1 暗示疗法：这种疗法主要应用于精神科的重症患者，由于某些患者癔症性失明、瘫痪或者感觉缺乏，因此便可以在其信任的情况下对其施以安慰剂进行治疗。
1.2.3.2 沟通交流法：这是药效心理学中最常用到的一种方法，医师与患者的交流沟通是了解患者病情最主要的途径，医师能够运用语言的技巧对患者及其家属进行心理抚慰，与其产生感情共鸣，有利于对其病情加深了解，制定更加准确的治疗方案，并取得更好的治疗成效。
1.2.3.3 明确告知治疗方案：这种方法主要适用于病患家属，在医师进行治疗的过程中，辅以家属的配合治疗，有利于心理药效的发挥。
1.3 统计学：本次实验数据采用spss13.0软件进行统计学，其中干预前后、组间数据资料对比采用t检验，计数资料对比采用卡方检验，以p＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
通过对我院进行药学心理学保健的患者进行观察统计，发现在其治疗前后，其身体状况得到了很大的改善。
3 讨论
由于患者的心理因素、身体机能与常人有着极大的不同，因此需要药学相关工作者进行识别与确认。药学保健事业的发展范围广泛，涉及到各个应用领域，根据我院一年以来医治的162例患者的病情研究，药学心理学对患者的病情恢复有很大的帮助，有利于医疗水平的提高以及医疗事业的发展。
转贴于上文库 www.ybask.com作者：庄文斌，陈吉生，朱泽华
【关键词】 抗微生物药物
摘要:目的 探讨抗微生物类药物药源性致死的特点和规律，以预防或减少其发生，促进临床合理使用抗微生物药物。方法 通过中国医院数字图书馆的chkd期刊知识库检索1998～20xx年报道的抗微生物药物药源性致死个案，自行建立数据库，对文献资料进行整理、汇总，并进行。结果 青霉素、庆大霉素、林可霉素、头孢唑啉致死病例数居前4位（占48.95％），静脉用药发生率（55.24％）最高，全身性反应致死占了很高的比例（62.24％）。结论 严格用药指征，按照药品说明书的用量用法使用，密切观察用药后反应，减少抗微生物药物药源性疾病或药源性致死的发生。
关键词:抗微生物药物；药源性致死；不良反应；合理用药
abstract: objective to delineate the characteristics and regularities of the death induced by antimicrobial drugs so as to recurrence and promote the rational use of the drugs.methods the case reports of antimicrobial drugs shock were searched chinese medication and healthy during the period of 1998 to 20xx by way of chkd database. to establish database,reviewing and yzing literatures. results mortality induced by penicillin,gentamicin,lincomycin and cefazolin in the first four places in the ranking (48.95%),intravenous use of drug have the highest incidence rate (55.24%). mortality of systematic reaction was higher (62.24%).conclusions the indications must be under strict control,the use of the medicines must follow the description. we should closely observe the response to drugs so as to reduce the illness or death induced by drugs.
key words:antimicrobial drugs; death induced by drugs; adverse reaction; rational use of drug
抗微生物类药物是目前在临床上使用非常广泛的一类药物，但随着抗微生物类药物的广泛使用，它所带来的不良反应日益增多，特别是由于使用抗微生物类药物引起的药源性致死的病例逐渐增多,逐渐引起人们的广泛重视。WWW.0519news.cOm为了保证临床用药安全有效，探讨抗微生物药物药源性致死的原因及其规律，预防和降低其发生率和死亡率。本文对1998～20xx年国内医药期刊报道的143例抗微生物类药物药源性致死报告进行评价，报告如下。
1 资料与方法
1.1 资料来源
利用中国医院数字图书馆的chkd期刊知识库检索1998～20xx年收载的中文医药卫生期刊，以“抗微生物药物”、“致死”作为关键词进行检索，从中筛选出在临床上因使用抗微生物类药物治疗过程中发生药物不良反应致死的文献共129篇，例数为143例，通过查找原文，自行建立数据库，利用数据库的功能对文献进行整理。
1.2 一般资料
129篇文献来自68种国内中文医刊，其中居文献数前3位的是：中国医院药学杂志17篇（13.2％），法医学杂志6篇（4.6％），中国药事5篇（3.9%）。
2 结 果
2.1 性别及年龄分布
抗微生物药物药源性致死患者年龄跨度比较大：从4月的婴幼儿［1］，到92岁的老人［2］。其中，男性83例，年龄从8个月到92岁；女性57例，年龄从1岁2个月到82岁；其中性别不明者3例，年龄及性别分布见表1。表1 抗微生物药物药源性致死性别及年龄分布情况（略）
2.2 给药途径分布
静脉给药79例（55.24％），其中静脉滴注71例（占静脉给药的89.87％），静脉推注8例（占静脉给药的10.13％）；口服30例（20.98％）；肌注14例（979％）；皮下注射（包含皮试）14例（9.79％）；其他途径给药（雾化吸收、鞘内注射、滴眼等）5例（350％），多途径给药1例（0.70％），见表2。表2 抗微生物药物给药途径分布表（略）
2.3 用药品种及分布
在143例抗微生物药物药源性致死报告中，涉及6大种类［3］，涉及药物42种，具体情况见表3、4。表3 药源性致死的药物种类及分布（略）表4 药源性致死例数排前8位的药品（略）
2.4 初次用药至死亡时间143例药源性致死病例按初次用药至死亡的时间分为7个时间段，不同时间段药源性致死病例构成比见表5。表5 药源性致死的用药时程分布（略）
2.5 药源性致死按系统受损器官分类
按who国际药物监测合作中心药物不良反应术语（adr terminology）器官分类代码［4］进行分类。药源性致死病例按系统受损器官分类情况详见表6。表6 药源性致死涉及的受损器官系统分类（略）
3 讨 论
3.1 药源性致死是指健康人或病情平稳的患者在疾病的预防、诊断或治疗过程中，因用药后出现药品不良反应（adr）而引起的死亡，不包括因原患疾病或与adr无关的死亡。本文结果显示抗生素类药物致死率占了将近80％，而其中青霉素、庆大霉素、林可霉素、头孢唑啉致死病例数居前4位（占48.95％），其中全身性反应（过敏反应）、消化系统（肝功能衰竭）、呼吸系统损害致死居前3位，占总的药源性致死病例的77.62％（111/143）。全身性反应占6224％（89/143），其中大部分是过敏性休克导致的死亡，应引起临床医生注意，应加强青霉素等皮试。
消化系统损害多为并发肝功能衰竭；呼吸系统损害多为并发下呼吸道感染和呼吸衰竭，临床要多注意并发症发生的可能。
3.2 抗微生物药物药源性致死与性别及年龄的关系
由表1可见，抗微生物药源性致死病例数在各年龄段差异不明显（20岁以下算一个年龄段），各年龄段男性略多于女性（1.55∶1）。提示抗微生物药物引起的严重不良反应，特别是b型不良反应(质变型异常)，具有不可预见性，对各年龄段病人均可以引起致死，应引起高度重视，要严格用药指征，按照、国家中医药管理局颁布的《抗菌药物临床应用指导原则》使用抗微生物药物，减少不规范预防用药，防止滥用。
3.3 抗微生物药物给药途径与药源性致死的关系
结果显示（见表2），静脉途径给药致死率最高(55.24%),口服致死次之（20.98％），但是口服致死的大部分是长期及用药过量所致，这是可以减少或避免的，所以建议临床治疗时应尽量减少静脉给药，可以口服或口服能保证疗效的尽量给予口服给药。
参考文献:
［1］李萍.氟哌酸过量致死［j］.中华儿科杂志，1995，33（6）：384.
［2］任进民.环丙沙星致肝功能衰竭死亡1例［j］.药学进展，1995，19（1）：54.
［3］陈新谦,金有豫，汤光.新编药物学［m］.15版.：卫生出版社，20xx:44-136.
［4］王士凡,孙定人,王功立，等.药物不良反应［m］.2版.:卫生出版社,1996:950-951.
【关键词】 柴胡皂苷
摘要:目的 研究柴胡皂苷a(saikosaponin a,ssa)对戊四氮（ptz）诱导的小鼠痫性发作的影响，了解其药效特点。 方法 采用ptz诱导小鼠急性痫性发作来制作癫痫模型，通过记录不同时间点小鼠痫性发作潜伏期和强直性惊厥率的变化，研究ssa抗小鼠ptz致痫作用的动态特征。结果 ssa 腹腔注射30、60、90 min组能显著延长阵发性痉挛潜伏期（p<0.05），其中ssa 90 min组作用最为显著（p<001）。在60、90、120 min组中，ssa 腹腔注射也能明显延长强直性惊厥潜伏期（p<0.05），其中尤以90 min组作用显著(p<001); ssa 90 min组对过渡时间延长作用显著（p<0.05）；ssa 30 min、60 min组能减少ptz致痫小鼠强直性惊厥发作例数（p<005），且以ssa 60 min组作用最为显著。结论 ssa具有对抗小鼠ptz致痫作用；腹腔注射ssa对ptz诱导小鼠的痫性发作在120 min内以60 min、90 min药效作用较强。
关键词:实验性癫痫;柴胡皂苷 a; ptz;小鼠
abstract: objective to study the dynamic variations of the effect of saikosaponin a (ssa) on epileptic mice induced by pentylenetetrazol（ptz）,and to understand the effect characteristics of ssa. method with the epileptic mice induced by ptz as animal model. in the different time point,the tentative seizure incubation period and the case of tetanic convulsion were recorded to study the characteristics of the antiepileptic effect of ssa on mouse induced by ptz. results in the group of 30min,60 min and 90 min,the incubation period of clonic cramp was significantly prolonged by ssa (p<0.05),and in the group of 90 min,the effect was remarkable (p<0.01). also,intraperitoneal injection of ssa could prolong the incubation period of tetanic convulsion in the group of 60 min,90 min and 120 min (p<0.05).the effect was especially evident in the group of 90 min (p<0.01). in the group of 90 min,the transition time was remarkably prolonged by ssa (p<0.05). in the group of ssa 30 min and ssa 60 min,ssa could reduce the tetanic convulsion of epileptic mice introduced by ptz (p<0.05),and the effect is more significant in the group of 60min than that in the group of 30min. in the group of 30 min and 60 min,ssa could protect the epileptic mice introduced by ptz from tetanic convulsion more significantly than those in the group of 90 min and 120 min.conclusions ssa can inhibit the epileptic mice induced by ptz,ssa can protect the mouse from tetanic convulsion,and in 2 hours,the effect was more remarkable at 60th min,90th min than others.
key words: epilepsy; saikosaponin a; ptz; mice
柴胡皂苷（saikosaponin）为中药柴胡的主要成分之一，其单体成分之一的柴胡皂苷a(ssa)有降血脂、抗渗出、抗肉芽肿和保护肝细胞等作用［1］，对于慢性肾病的治疗也有较好疗效［2，3］，但目前尚没有ssa抗癫痫作用的报道。wWw.0519news.cOM不过已有不少证据表明柴胡及柴皂苷具有镇静和抗实验性癫痫的作用［4，5］。在柴胡皂苷单体各成分中，为明确何种皂苷单体具有抗癫痫作用，笔者研究了ssa对ptz致痫小鼠痫性发作的影响，并探讨ssa对痫性发作影响的不同时间的动态变化，以期了解ssa抗癫痫药效作用的时间特点。
1 材 料
1.1 动物
健康昆明种小鼠180只，雌雄各半，体质量（20±2）g,由南方医科大学动物实验中心提供，合格证号为20xxa063。
1.2 主要试剂
柴胡皂苷a购自上海医药工业研究所，批号050106；丙戊酸钠（vpa）注射剂（德巴金）由杭州赛诺菲圣德拉保民生制药有限公司生产，批号0402049。 戊四氮由美国sigma公司生产，批号064k0686。
2 实验方法
2.1 实验动物分组
将180只昆明小鼠随机分为9 组，每组20只，雌雄各半。a组:生理盐水组（生理盐水+ ptz致痫），作为以下各组的对照组；b、c、d、e组分别为经ssa预处理30、60、90、120 min组（ssa 30 min、ssa 60 min、ssa 90 min、ssa 120 min + ptz致痫）；f、g、h、i组分别为经vpa预处理30、60、90、120 min组(vpa 30 min、vpa60 min、vpa90 min、vpa120 min + ptz致痫)。
2.2 模型制备及给药方法
a组小鼠在腹腔内注射生理盐水（10 ml/kg）后30 min时腹腔注射ptz（85 mg/kg）致痫；b、c、d、e组小鼠分别在腹腔注射ssa（7.24 mg/kg）后30、60、90、120 min时腹腔注射上述剂量的ptz致痫；f、g、h、i组小鼠分别在腹腔注射vpa (200 mg/kg)后30、60、90、120 min时腹腔注射上述剂量的ptz致痫。
2.3 观察指标
小鼠痫性发作分级采用racine标准［4］。0级：无发作反应；1级：节律性口角、耳或面部肌肉抽动阵挛；2级：点头并伴随更严重的面部肌肉抽动阵挛；3级: 出现前肢阵挛但不伴随直立；4级：前肢阵挛伴随直立；5级：全身强直阵挛发作而跌倒。腹腔注射ptz后立即观察小鼠的行为动作，连续10 min，记录小鼠痫性发作潜伏期，包括阵发性痉挛潜伏期（即从注射ptz开始至相当于1~3级发作的时间）、强直性惊厥潜伏期（即从注射ptz开始至相当于5级发作的时间），计算由阵发性痉挛向强直性惊厥发作的过渡时间；并记录发生强直性惊厥的例数，计算其发作率。
2.4 统计学处理
应用spss10.0软件，多样本均数的比较采用方差，计数资料及率的比较用卡方检验，以p<005为差异有显著性。 3 结 果
3.1 ssa对ptz致痫小鼠痫性发作潜伏期的动态影响
将对应时间点ssa预处理、vpa预处理组与生理盐水组比较，b、c、d、f、g、h各组阵发性痉挛潜伏期明显延长，与a组比较差异有显著性（p<0.05），其中尤以d、f、g组差异显著（p<0.01）；c、d、e、f、h组强直性惊厥潜伏期同样延长，与a组比较差异有显著性（p<0.05），其中尤以d、f组差异显著(p<001)；在过渡时间的比较中，d、f组与a组比较差异均有显著性（p<0.05），其中尤以f组差异显著(p<0.01)。将对应时间点的ssa组与vpa组比较，30 min时 ssa组对各潜伏期的延长作用不如vpa组(p<001)，其余各时间点比较差异无显著性。见表1。以上结果提示，ssa不仅能明显延长阵发性痉挛潜伏期，而且能够显著延长强直性惊厥潜伏期及其过渡时间，其作用在60 min、90 min时强于30 min、120 min时，而vpa的作用以30 min和60 min强于90 min与120 min，可见ssa达到最佳作用的时间比vpa延后。表1 ssa对ptz致痫小鼠痫性发作潜伏期的动态影响（略）
3.2 ssa对ptz致痫小鼠强直性惊厥发作例数的动态影响
根据小鼠10 min内在ptz诱导下出现强直性惊厥的例数，将对应时间点ssa预处理组、vpa预处理组与生理盐水组比较，ssa与vpa预处理30 min、60 min组出现强直性惊厥例数与生理盐水组比较差异有显著性，其作用优于90 min、120 min组。见表2。表2 ssa对ptz致痫小鼠强直性惊厥发作例数的动态影响（略）
4 讨 论
ptz为很强的致痫剂，其致痫模型被认为是理想的全身强直性惊厥发作模型之一,ptz本身无特殊的神经毒性作用［6］,所以被广泛应用于癫痫发病机理的研究、抗癫痫药物的筛选。当ptz诱发小鼠癫痫发生时，其痫性发作的特点是初期以阵挛性发作为主，很快以全身强直性惊厥发作为主要特点，根据其发作特点，在本研究中以这2种发作形式为指标并结合目前公认的racine标准来其痫性行为。
vpa是临床常用抗癫痫的主要药物之一，有广谱抗癫痫作用，对单纯失神发作及全身强直阵挛(惊厥)发作疗效最好，对单纯及复杂部分性发作、肌阵挛性发作等也有良效。有文献研究vpa在大鼠血清和脑脊液浓度变化时发现，脑脊液内最高药物浓度低于血清浓度，且其达到最高药物浓度时间迟于血清药物最高浓度，其半衰期约为60 min［7］。本研究也证实vpa既能延长阵发性痉挛、强直性惊厥的潜伏期，也能抑制强直性惊厥发作率，明显减少惊厥发生例数，其作用以30 min和60 min时尤为明显，与文献报道一致。本研究结果显示，ssa不仅能明显延长小鼠阵发性痉挛的潜伏期，而且能够显著延长强直性惊厥的潜伏期及其过渡时间，能明显减少小鼠发生强直性惊厥的例数，抑制惊厥发作率，其作用在60 min、90 min时较强。提示ssa具有较好的抗实验性癫痫作用，可能对肌阵挛性发作、全身强直阵挛发作有效。就本研究给出的剂量而言，30 min时 ssa对小鼠各潜伏期的延长作用不如vpa，但随着时间的延长，ssa在60 min、90 min时对潜伏期的延长明显，可能与ssa的起效作用较慢有关。至于ssa的代谢特点，有研究显示其口服代谢时与消化道的菌群有密切关系［8］，其代谢呈现时间依赖性，早期有学者将其在体外胃液及肠道细菌共同培养发现ssa在3 h内完全被代谢，而转化为其他类型的皂苷或苷元［9］。
但ssa在血清及脑脊液中的变化情况如何，其代谢与药效作用是否相关，以及ssa能否在更长的时间内维持其作用，还有待进一步研究。
参考文献:
［1］欧明，林励，李衍文.简明中药成分手册［m］.：中国医药科技出版社,20xx：318.
［2］张相年,张相波. 柴胡皂苷的生理活性及在治疗肾病中的应用［j］.广东药学院学报,2000,16(2): 121.
［3］hattori t,ito m,suzuki y. studies on antinephritic effects of plant components in rats (1)：effects of saikosaponins originaltype antigbm nephritis in rats and its mechanis［j］. nippon yakurigaku zasshi，1991,97(1):13.
［4］李静，谢炜，陈宝田.柴胡对实验性癫痫大鼠的治疗作用［j］.中药药理与临床,2000,16：28.
［5］黄运生，谢炜，陈宝田.柴胡皂苷对癫痫大鼠脑电图影响［j］.第一军医大学学报,20xx,24(12)：1 379.
［6］holmes g l. seizureinduced neuronal injury animal data ［j］.neurology，20xx,59(suppl 5):s3.
［7］龙小艳，章蓓，肖波.丙戊酸在癫痫大鼠海马的神经药代动力学特征［j］.脑神经杂志，20xx，10(6):330.
［8］严梅桢.人肠道菌对柴胡皂苷的代谢［j］.国外医学：中医中药分册，20xx,23 (3) :156
［9］shimizu k,amagaya s,ogihara y. structural transformation of saikosaponins by gastric juice and intestinal flora［j］. j pharmacobiodyn,1985,8(9):718.
【关键词】 洛伐他汀合成酶合成酶
摘要:目的 monascus ruber 5031洛伐他汀合成酶基因的结构。方法 用3对以土曲霉洛伐他汀合成酶基因为基础设计的pcr引物对红曲霉基因组进行了pcr，其中一对引物序列为，正向：5’ttc gat gcg gcc ttc ttc aat3’和反向5’atg gtt cgg cat cgt aat tcc 3’ 。结果 在红曲霉基因组中相当于土曲霉洛伐他汀合成酶基因的lnks区域扩增出了745 bp的核酸片段，其序列与土曲霉合成酶的这一区域序列相同。结论 土曲霉和红曲霉洛伐他汀合成酶基因存在同源区域。
关键词:红曲霉平；土曲霉；洛伐他汀合成酶合成酶；pcr
abstract: objective yses the structure of monascus ruber 5031 lovastatin biosynthesis gene cluster. methods three pairs of degenerate pcr primers were designed matching the regions of lovastatin biosynthesis gene cluster in aspergillus terreus,one of them is,5’primer: ttc gat gcg gcc ttc ttc aat,3’primer: atg gtt cgg cat cgt aat tcc. results a 745bp dna sequence was amplified by pcr from monascus ruber 5031 genomic dna and the sequence is the same with aspergillus terreus lovastatin biosynthesis gene. conclusion there is similar sequence within the lovastatin biosynthesis gene cluster of aspergillus terreus and monascus ruber.
key words:monascus ruber；aspergillus terreus；lovastatin biosynthesis gene cluster; pcr
红曲霉（monascus ruber ）中产生的莫那可林k（monacolin k）即洛伐他汀(lovastatin)，是胆固醇生物合成中的关键酶hmgcoa还原酶的竞争性抑制剂，是目前治疗高血脂症最有效的药物之一，并且对心绞痛患者和心肌梗死患者也有一定的治疗效果［1］。wWw.0519news.Com此外，它还可下调炎症相关转录因子的表达,从而有益于治疗动脉粥样硬化症［2］。近期研究表明,它可促进恶性甲状腺细胞凋亡［3］，具有抑制乳腺癌细胞增殖的功能［4］。
对参与洛伐他汀生物合成的聚酮合成酶的研究主要在土曲霉中进行［5-7］，土曲霉也是目前工业化生产洛伐他汀的主要菌种。reeves和vederas等研究了土曲霉（aspergillus terreus）洛伐他汀的pks基因结构，序列发现在克隆的64 kb dna中有18个开放读框（orf），经序列对比确定了13个orf的功能。其基因簇可分为洛伐他汀结构中九酮部分的合成酶基因（即lnks）和二酮部分的合成酶基因（即ldks），lnks也称为lovb，而ldks含有的功能域有：lovc（烯酯酰还原酶）、lovd（转脂酶）、orf8（hmgcoa还原酶）、love（调节蛋白）、lovf（聚酮合成酶）、orf13（调节蛋白）及细胞色素p450 加单氧酶等。
红曲霉中与合成洛伐他汀相关基因的结构的研究则较少，chen等［8］于20xx年8月发往genebank的丛毛红曲霉的莫那可林k合成酶基因簇是第一个被发现的红曲霉合成洛伐他汀相关酶的基因簇。由于红曲霉中可产生洛伐他汀及多种有生理活性的物质，它又是传统的食品添加剂，所以通过研究红曲霉中洛伐他汀合成相关基因将有利于更好地开发利用红曲霉。本文分别以土曲霉的lnks基因的ks区域（位于lovb基因区域内）、土曲ldks基因簇中的lovc（烯酯酰还原酶功能域）及love（调控蛋白功能域）基因为靶标设计了3对pcr引物，以这3组引物对产洛伐他汀的红色红曲霉菌的基因组dna进行了pcr。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株和培养基
红曲菌种：中国工业微生物菌种保藏中心红色红曲霉monascus ruber 5031。
斜面培养基：取50 g大米，洗净加水800 ml，煮成稀粥，冷却到60~65 ℃。将150 g麦芽粉掺入大米粥中搅拌均匀，放入55~60 ℃保温箱内糖化4 h，取出过滤。取250 ml加250 ml水，加2%的琼脂，装瓶、灭菌。
菌丝生长培养基：以上培养基不加琼脂。
1.1.2 仪器与试剂
日立高速冷冻离心机。monacolin k 标准品，购自sigma公司。pcr引物由上海生工合成。taq酶采用上海生工的taq plus。上海生工的胶回收试剂盒uniq-10。takara公司的pmd-18t克隆载体。
1.2 方法
1.2.1 培养方法
用2 ml无菌水冲洗孢子，接入固体斜面培养。
固体斜面培养7 d后，以5 ml水洗下，稀释至浓度为107个/ml，取2 ml加入100 ml菌丝生长培养基，培养温度28 ℃，转速150 r/min。培养4 d。
1.2.2 红曲基因组dna的提取
根据文献［9］的方法改进而成。取1 g菌丝，液氮中磨成粉状，加入5 ml 2×ctab缓冲液［100 mmol/l triscl (ph 8.0),20 mmol/l edta,1.4 mol/l nacl,2%(ρ)ctab,2%(ρ)β巯基乙醇］，58 ℃ 1 h，冷至室温后加入等体积氯仿异戊醇（24∶1）抽提，10 000 g离心10 min，取上清，加入0.1倍体积10% ctab0.7 mol/l nacl溶液，温和摇动，再加入等体积氯仿异戊醇（24∶1）抽提，10 000 g离心10 min，取上清，加入2/3体积预冷异丙醇沉淀dna，1 000 g离心15 min，沉淀溶于100 μl te中，加入rnasea至终质量浓度100 μg/ml，37 ℃作用2 h，加入等体积酚氯仿（1∶1）抽提，10 000 g离心10 min，上清中加入2倍体积无水乙醇沉淀dna，沉淀用70%乙醇洗1遍，风干，溶于te，4 ℃保存。
1.2.3 pcr引物的设计
3对pcr引物的设计详见表1。表1 pcr引物的设计（略）
第1组引物是参照thomas等［10］针对土曲霉的lovb基因的ks功能域序列设计的引物设计的。
1.2.4 pcr反应
①反应体系：200 μmol/l dntps,1 u taq酶，2.625 mmol/l mgcl2,2 μmol/l mgso4,10 mmol/l kcl,10 mmol/l (nh4)2so4,20 mmol/l trishcl(ph 8.75),0.1% tritonx100,0.1 mg/ml bsa,模板40 ng（基因组dna和cdna）,引物60 ng，总反应体积20 μl。②热循环条件：94 ℃预变性5 min，之后以94 ℃ 1 min，50 ℃ 1 min，72 ℃ 2 min程序45个循环，延伸72 ℃ 10 min。 1.2.5 lovb扩增片段的克隆与测序
回收及克隆红曲的lovb引物扩增产物中约750 bp的片段，其中连接反应液成分为pmd18t载体1 μl，pcr产物4.5 μl，含t4连接酶和连接酶缓冲液的solutionⅰ5 μl，在16 ℃连接2 h。大肠杆菌dh5α感受态的制备及转化均按分子克隆指南方法操作。克隆的片段交由taraka公司完成测序。
2 结 果
2.1 以基因组dna进行扩增反应的结果,见图1。
图1表明第1组引物对lovb的扩增得到了预期的产物(745 bp)，而第2组和第3组引物对lovc和love的扩增均未得到预计的产物。
2.2 lovb扩增片段测序结果
回收约745 bp的片段，并进行测序。经与土曲霉洛伐他汀合成酶基因对比，序列完全相同，序列如下，其中阴影部分是引物序列。
3 讨 论
3.1 lovb相关的第一组引物的设计及结果
第1组引物参考了thomas等［10］针对土曲霉lovb（长度约11 kb）中ks功能域设计的引物，thomas等在设计引物的过程中参考了土曲霉产生洛伐他汀酶基因序列及其他真菌的聚酮合成酶基因和真菌的脂肪酸合成酶基因，使其不易扩增出其他相似功能的基因。其原设计的引物为正向5’ttt cat gci gci ttt ttt aa3’；反向5’atg att igg cat ict iat tcc 3’。本文根据这两段引物及土曲霉lovb基因相关序列设计出第1组引物。从测序结果来看，表明本文中所用的红色红曲霉基因组中有与土曲霉lovb中相关序列一致的745 bp的序列，它很可能就是红色红曲霉中洛伐他汀合成酶基因簇中的一部分。
3.2 lovc相关的第2组引物的设计和love相关的第3组引物的设计
土曲霉洛伐他汀合成酶基因中的ldks长度约为43 kb，含有lovc和love等功能域。
第2组和第3组引物是以primer 3程序根据土曲霉洛伐他汀合成酶基因lovc和love设计的引物，在设计过程中避开了内含子。但在本实验中未得到预期扩增片段，可见在红色红曲霉和土曲霉中的这2个基因差异较大。
3.3 3组引物与新发现的丛毛红曲霉的洛伐他汀合成酶基因簇［8］的电子pcr
从丛毛红曲霉中得到的洛伐他汀基因簇长度约45 kb，genebank 序列号为dq176595，含有mkamki等9个功能域，其中mka和mkb是聚酮合成酶功能域，其他功能域与ldks类似，但不含烯酯酰还原酶功能域。3组引物都未能从找到匹配序列，也即没有扩增产物。
洛伐他汀生物合成过程复杂，其合成酶基因簇庞大，不同红曲霉洛伐他汀合成酶基因有较大的差异，本文pcr扩增的片断可作为克隆monascus ruber 5031洛伐他汀合成酶基因的探针。
参考文献:
［1］auer j,eber b. a clinical focus on statins［j］. curr opin investig drugs，20xx,2(3):382.
［2］dichtl w,dulak j,frick m ，et al. hmgcoa reductase inhibitors regulate inflammatory transcription factors in human endothelial and vascular ooth muscle cells［j］. arterioscler thromb vasc biol，20xx,23(1):58.
［3］zhong w b,wang c y,chang t c. et al. lovastatin induces apoptosis of anaplastic thyroid cancer cells via inhibition of protein geranylgeranylation and de novo protein synthesis［j］. endocrinology，20xx,144(9): 3 852.
［4］张萍,糜漫天,韦娜,等. 洛伐他汀对mcf27细胞prb蛋白表达及增殖功能的影响［j］. 中国公共卫生,20xx,18 (10):1198.
［5］hendrickson l,davis c r,roach c,et al. lovastatin biosynthesis in aspergillus terreus : characterization of blocked mutants,enzyme activities and a multifunctional polyketide synthase gene［j］. chem biol，1999,6:429.
［6］kenndy j，auclair k，kendrew s g,et al. modulation of polyketides synthase activity by accessory proteins during lovastatin biosynthesis［j］. science,1999,284:1 368.
［7］sutherland a,auclair k,vederas j c. recent advances in the biosynthetic studies of lovastatin［j］. current opinion in drug discovery and development,20xx,4(2): 229.
［8］chen y p,liaw l l,wang c l,et al. monascus pilosus monacolin k biosynthetic gene cluster,complete sequence. direct submission (23aug20xx)［db］. 序列号：dq176595，genebank［130920xx］.
［9］蔡晶晶. 透明颤菌血红蛋白基因在洛伐他汀产生菌土曲霉中的表达［d］. 中国农业大学博士学位论文,2000.
［10］thomas p n,brain a m r,mike d,et al. design and utility of oligonuxleotide gene probes for fungal polyketide synthases［j］. chemistry & biology,20xx,8(2): 157.
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